El cultivo de células eucariotas es un proceso fundamental en la biología celular, la medicina y la investigación biomédica. Los pasos generales son los siguientes, aunque los detalles exactos pueden variar según el tipo de célula que se cultive y el objetivo del experimento:
1. **Elección del tipo de célula**: Decide qué tipo de células eucariotas quieres cultivar, como células de mamífero, células de plantas, células de hongos, etc. Cada tipo tendrá requisitos específicos de cultivo.
2. **Obtención del inóculo inicial**: Para empezar el cultivo, necesitas un inóculo inicial de células, que se obtiene bien sea de un banco de células existente o de un tejido u organismo vivo.
3. **Medio de cultivo**: Prepara o adquiere el medio de cultivo adecuado, que proporcionará los nutrientes necesarios, como aminoácidos, vitaminas, minerales, glucosa y suero, además de tener el pH y la osmolalidad correctos para el crecimiento celular.
4. **Condiciones ambientales**: Proporciona condiciones ambientales óptimas, las cuales suelen incluir una temperatura adecuada (generalmente 37°C para células de mamíferos), una atmósfera controlada con niveles adecuados de CO2 (a menudo alrededor del 5%) y una humedad relativa alta.
5. **Aséptico y estéril**: Realiza todos los procedimientos de forma aséptica para evitar la contaminación con bacterias, hongos o virus. El uso de capuchas de flujo laminar y técnicas estériles es esencial.
6. **Siembra**: Coloca las células en un recipiente de cultivo, como una botella de cultivo, un plato de Petri o un frasco de cultivo, con el medio de cultivo adecuado. La densidad de siembra dependerá del tipo de célula y del propósito del cultivo.
7. **Incubación**: Coloca las células en una incubadora para mantener las condiciones ambientales controladas. Durante la fase de incubación, las células se adherirán (si son adherentes) y crecerán hasta alcanzar la confluencia o el nivel de densidad deseado.
8. **Monitoreo y mantenimiento**: Observa regularmente las células bajo un microscopio para verificar su morfología y crecimiento. Cambia el medio de cultivo periódicamente para reabastecer los nutrientes y eliminar los desechos metabólicos.
9. **Subcultivo o pasaje**: Una vez que las células alcanzan la densidad adecuada, debes realizar el pasaje para evitar el sobrecrecimiento y mantener las células en fase de crecimiento logarítmica. Esto implica despegar las células del recipiente de cultivo (mediante enzimas como tripsina o mecánicamente) y trasladar una fracción de ellas a un nuevo recipiente con medio fresco.
10. **Criopreservación**: Para almacenamiento a largo plazo, las células se pueden congelar en nitrógeno líquido utilizando un crioprotector (como el dimetilsulfóxido, DMSO) para frenar todos los procesos metabólicos y evitar daños por congelación.
El cultivo de células eucariotas requiere además un seguimiento cuidadoso para detectar cualquier signo de contaminación o cambios anormales en el crecimiento celular y realizar ajustes en las condiciones de cultivo según sea necesario.
